РЕАКЦИЯ СВЯЗЫВАНИЯ КОМПЛЕМЕНТА

(РСК) - серол. реакция, используемая для количественного определения комплементсвязывающих Ат и Аг. Принцип РСК состоит в том, что специфический иммунный комплекс полностью или частично адсорбирует добавленный в систему С. В качестве количественного индикатора связывания С берутгемолитическую систему,гемолиз к-рой указывает на отсутствие иммунного комплекса в диагностической системе(отрицательная РСК),задержка гемолиза - на присутствие иммунного комплекса(положительная РСК).В РСК применяют: 1) прогретую при 57 °С 30 мин иссл. с-ку, она должна быть свежей, без взвешенных частиц, цитотоксинов, С. В опыт обычно берут несколько кратных 2 разведении с-ки в зависимости от диагностического титра РСК при предполагаемом заболевании; 2) диагностикум продажный или специально приготовленный для РСК; 3) С в рабочей дозе, к-рая при титровании с Аг равна титру С, а при титровании без Аг - выше титра С на 20 - 25%; 4) эритроциты барана отмывают несколько раз физраствором и готовят 3% взвесь; 5) гемолитическую с-ку разводят в 3 раза меньше титра, указанного на этикетке. Все 5 компонентов берут в одинаковом объеме (0,5 мл или 0,25 мл). В опытную (диагностическую) систему вводят иссл. с-ку, диагностикум, С. Готовят контроли: с-ки - с-ку, С и физраствор (вместо Аг); диагностикума -диагностикум, С и физраствор (вместо с-ки); С- С и двойной объем физраствора; заведомо положительный -стандартная иммунная с-ка, Аг, С; заведомо отрицательный - нормальная с-ка, Аг, С. Пробирки встряхивают и ставят в термостат при 37 °С на 45 мин. Одновременно заготавливают гемолитическую систему, смешивая равные объемы 3% взвеси эритроцитов барана и гемолитической с-ки, и инкубируют ее в термостате такое же время. После сенсибилизации во все опытные и контрольные пробирки добавляют двойной объем гемолитической системы (1 мл или 0,5 мл). Все пробирки выдерживают в термостате при 37°С до появления полного гемолиза в контрольных пробирках (около 30 - 40 мин). При количественном способе постановки реакции находят разведение, в к-ром имеется задержка гемолиза не менее чем на 2+ (титр Ат иссл. с-ки) и сравнивают его с диагностическим титром распознаваемой болезни. Полуколичественный способ с одним разведением с-ки (обычно 1:5) дает возможность определить степень задержки гемолиза на 4+, 3+, 2+ и, исходя из этого, оценить интенсивность реакции. Более точные результаты представляет нахождение титра с-ки не по 100%, а по 50% гемолизу (см.Комплемента определение).Предложен вариант количественной постановки РСК, в к-ром берут одно разведение с-ки, но несколько доз С (1; 1,5; 2; 2,5; 3; 4). Все остальные компоненты используют в таких же количествах. При оценке имеют в виду то обстоятельство, что чем больше доз С связывает иссл. с-ка, тем больше в ней Ат.